АМОКСИЦИЛЛИН, КАПСУЛЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Содержание амоксициллина (C₁₆H₁₉N₃O₅S) в виде амоксициллина тригидрата в препарате должно быть не менее 90.0% и не более 120.0% от указанного на этикетке^USP.

Капсулы должны соответствовать требованиям общей монографии Капсулы (0016) и следующим требованиям.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

На хроматограмме испытуемого раствора, полученной при количественном определении, время удерживания основного пика должно соответствовать времени удерживания пика амоксициллина на хроматограмме раствора сравнения (а).

ИСПЫТАНИЯ

Растворение (2.9.3). Испытание проводят в следующих условиях^USP:

Испытание 1. Испытание проводят с использованием прибора 1 для капсул, содержащих 250 мг амоксициллина, и прибора 2 для капсул, содержащих 500 мг амоксициллина, в следующих условиях:

-среда растворения – вода Р;

-объем среды растворения – 900 мл;

-скорость вращения мешалки – 100 об/мин (прибор 1) или 75 об/мин (прибор 2);

-время растворения – 60 мин.

Испытуемый раствор. Часть испытуемого  раствора фильтруют через подходящий фильтр, при необходимости разводят средой растворения до концентрации раствора сравнения.

Раствор сравнения. Раствор СО ГФ РК амоксициллина  в среде растворения.

Количество амоксициллина (C₁₆H₁₉N₃O₅S), перешедшее в среду растворения, определяют, используя УФ-поглощение при длине волны 272 нм. Количество амоксициллина, перешедшее в среду растворения через 60 мин, должно быть не менее 80% (Q) от указанного на этикетке.

Испытание 2. Если препарат соответствует требованиям данного испытания, на этикетке должно быть указано о соответствии препарата требованиям Испытания 2 раздела Растворение:

прибор 1;

-среда растворения – вода Р;

-объем среды растворения – 900 мл;

-скорость вращения мешалки – 100 об/мин;

-время растворения – 90 мин.

Испытуемый раствор. Часть испытуемого  раствора фильтруют через подходящий фильтр, при необходимости разводят средой растворения до концентрации раствора сравнения.

Раствор сравнения. Раствор СО ГФ РК амоксициллина  в среде растворения.

Количество амоксициллина (C₁₆H₁₉N₃O₅S), перешедшее в среду растворения, определяют, используя УФ-поглощение при длине волны 272 нм. Количество амоксициллина, перешедшее в среду растворения через 90 мин, должно быть не менее 80% (Q) от указанного на этикетке.

Родственные примеси. Определение проводят методом жидкостной хроматографии (2.2.29) в условиях, описанных в разделе Количественное определение, дополнительно используя раствор сравнения с концентрацией амоксициллина 0.01 мг/мл и раствор плацебо для исключения пиков вспомогательных веществ на хроматограмме испытуемого раствора.

Содержание только одной единичной примеси в препарате должно быть не более 1.5% либо любой другой единичной примеси – не более 1.0% ^BP, суммы примесей должно быть не более 5.0 %.

Вода (2.5.12). В соответствии с требованиями спецификации производителя.

Микробиологическая чистота (5.1.4). В соответствии с требованиями.

Однородность дозированных единиц (2.9.40). В соответствии с требованиями.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом жидкостной хроматографии (2.2.29). Растворы и подвижная фаза должны быть свежеприготовленными.

Растворитель. 6.80 г калия дигидрофосфата Р растворяют в 1000 мл воды Р и доводят рН 45% раствором калия гидроксида Р до значения 5.0±0.1.

Испытуемый раствор. К точной навеске содержимого капсул, эквивалентной 200 мг амоксициллина, прибавляют 50 мл растворителя, перемешивают на ультразвуковой бане, доводят объем раствора тем же растворителем до 100.0 мл, перемешивают и фильтруют. 5.0 мл полученного раствора доводят растворителем до объема 10.0 мл.

Раствор сравнения (а). 25.0 мг СО ГФ РК амоксициллина тригидрата растворяют в растворителе и доводят объем раствора тем же растворителем до 25.0 мл.

Раствор сравнения (b). 5.0 мг СО ГФ РК цефазолина натриевой соли растворяют в растворителе и доводят объем раствора тем же растворителем до 50.0 мл. 5.0 мл полученного раствора и 5.0 мл раствора сравнения (а) доводят растворителем до объема 100.0 мл.

Хроматографирование проводят на жидкостном хроматографе с УФ-детектором в следующих условиях:

-колонка из нержавеющей стали размером 0.25 м•4.6 мм, заполненная силикагелем -октадецилсилильным для хроматографии Р, с размером частиц 5 мкм;

-подвижная фаза А: ацетонитрил Р – растворитель (1:99);

-подвижная фаза В: ацетонитрил Р – растворитель (20:80);

-скорость подвижной фазы – 1.5 мл/мин;

-детектирование при длине волны 254 нм.

Уравновешивают колонку при соотношении подвижных фаз А:В (92:8).

Хроматографируют по 20 мкл испытуемого раствора и растворов сравнения (а) и (b) при соотношении подвижных фаз А:В (92:8), сразу же после выхода пика амоксициллина в течение 25 мин соотношение подвижных фаз А:В доводят до 0:100, затем продолжают хроматографирование подвижной фазой В в течение 15 мин.

Время удерживания пика амоксициллина составляет около 6 мин.

Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:

-эффективность хроматографической колонки, рассчитанная для пика амоксициллина на хроматограмме раствора сравнения (а), составляет не менее 2 000 теоретических тарелок;

-коэффициент симметрии, рассчитанный для пика амоксициллина на хроматограмме раствора сравнения (а), составляет не более 1.6;

-относительное стандартное отклонение, рассчитанное для площади пика амоксициллина на хроматограмме раствора сравнения (а), составляет не более 2.0%;

-порядок выхода пиков: амоксициллин, цефазолин;

-разрешение между пиками цефазолина и амоксициллина на хроматограмме раствора сравнения (b) составляет не менее 10.0.

Содержание амоксициллина (C₁₆H₁₉N₃O₅S) рассчитывают с учетом его количества в СО ГФ РК амоксициллина тригидрата.

ХРАНЕНИЕ^USP

В плотно укупоренном контейнере при контролируемой комнатной температуре.

МАРКИРОВКА

При описании в разделе Растворение более одного испытания на этикетке указывают номер испытания, если Испытание 1 не используется.

 

АМОКСИЦИЛЛИН, ТАБЛЕТКИ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Содержание амоксициллина (C₁₆H₁₉N₃O₅S) в виде амоксициллина тригидрата в препарате должно быть не менее 90.0% и не более 120.0% от указанного на этикетке^USP.

Таблетки должны соответствовать требованиям общей монографии Таблетки (0478) и следующим требованиям.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

На хроматограмме испытуемого раствора, полученной при количественном определении, время удерживания основного пика должно соответствовать времени удерживания пика амоксициллина на хроматограмме раствора сравнения (а).

ИСПЫТАНИЯ

Растворение (2.9.3). Испытание проводят в соответствии со следующей методикой^USP:

прибор 2;

-среда растворения – вода Р;

-объем среды растворения – 900 мл;

-скорость вращения мешалки 75 об/мин;

-время растворения 45 мин^{ГФ РК}.

Определение проводят методом жидкостной хроматографии á621ñ.

Буферный раствор. 27.2 г калия дигидрофосфата растворяют в 3 л воды Р, корректируют значение рН 45% (м/м) раствором калия гидроксида до значения 5.0±0.1 и доводят водой до объема 4 л.

Испытуемый раствор. Часть испытуемого раствора фильтруют через подходящий фильтр с размером пор 0.5 мкм. Точный объем полученного фильтрата разбавляют водой Р до концентрации амоксициллина 0.045 мг/мл.

Полученный раствор используют в течение 6 ч после приготовления.

Раствор сравнения. К точной навеске СО ГФ РК амоксициллина прибавляют буферный раствор до концентрации 0.05 мг/мл.

Примечание. Полученный раствор используют в течение 6 ч после приготовления.

Хроматографирование проводят на жидкостном хроматографе с УФ-детектором детектором в следующих условиях:

защитная колонка размером 2 см•2 мм, заполненная сорбентом L2;

-колонка размером 30 см•3.9 мм, заполненная сорбентом L1;

-подвижная фаза: ацетонитрил – буферный раствор (1:39);

-температура колонки – 40+1° С;

-скорость подвижной фазы – 0.7 мл/мин;

-детектирование при длине волны – 230 нм.

Хроматографируют 10 мкл раствора сравнения. Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:

-эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику амоксициллина, составляет не менее 1700 теоретических тарелок;

-коэффициент симметрии, рассчитанный для пика амоксициллина, составляет не более 2.5;

-относительное стандартное отклонение, рассчи­танное для площади пика амоксициллина, составляет не более 1.5%;

коэффициент емкости, рассчитанный для пика амоксициллина, составляет 1.1-2.8;

Хроматографируют по 10 мкл раствора сравнения и испытуемого раствора. Количество амоксициллина, перешедшее в среду растворения, в процентах рассчитывают по формуле:

где

S_T – площадь пика амоксициллина на хроматограмме испытуемого раствора;

S_S – площадь пика амоксициллина на хроматограмме раствора сравнения;

C_S –  концентрация СО ГФ РК  амоксициллина в растворе  сравнения в миллиграммах на миллилитр;

V – объем среды растворения, равный 900 мл;

a – содержание амоксициллина, указанное в таблетке, в миллиграммах;

P – активность амоксициллина в СО ГФ РК амоксициллина в микрограммах на миллиграмм;

D – коэффициент разбавления испытуемого раствора;

F – коэффициент пересчета, равный 0.001 мг/мкг.

Количество амоксициллина, перешедшее в среду растворения через 45 мин^{ГФ РК}, должно быть не менее 75% (Q) от указанного на этикетке.

Для жевательных таблеток. Испытание проводят так, как указано выше.

Для жевательных таблеток с дозировкой 200 мг или 400 мг: время растворения – 20 мин.

Количество амоксициллина, перешедшее в раствор через 20 мин, должно быть не менее 70% (Q) от указанного на этикетке.

Для жевательных таблеток с дозировкой 125 мг или 250 мг: время растворения – 90 мин.

Количество амоксициллина, перешедшее в раствор через 90 мин, должно быть не менее 70% (Q) от указанного на этикетке.

Для таблеток, применяемых в ветеринарии. Испытание проводят как указано выше, за исключением скорости вращения мешалки, равной 100 об/мин.

Родственные примеси. Определение проводят методом жидкостной хроматографии (2.2.29) в условиях раздела Количественное определение, дополнительно используя раствор сравнения с концентрацией амоксициллина 0.01 мг/мл и раствор плацебо для исключения пиков вспомогательных веществ на хроматограмме испытуемого раствора.

Содержание только одной единичной примеси в препарате должно быть не более 1.5%, любой другой единичной примеси – не более 1.0 % ^BP,  суммы примесей должно быть не более 5.0 %.

Вода (2.5.12). В соответствии с требованиями спецификации производителя.

Остаточные растворители (5.4). При необходимости – в соответствии с требованиями.

Микробиологическая чистота (5.1.4). В соответствии с требованиями.

Однородность дозированных единиц (2.9.40). В соответствии с требованиями.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом жидкостной хроматографии (2.2.29). Растворы и подвижная фаза должны быть свежеприготовленными.

Растворитель. 6.80 г калия дигидрофосфата Р растворяют в 1000 мл воды Р и доводят рН 45% раствором калия гидроксида Р до значения 5.0±0.1.

Испытуемый раствор. К точной навеске порошка растертых таблеток, эквивалентной 200 мг амоксициллина, прибавляют 50 мл растворителя, перемешивают на ультразвуковой бане, доводят объем раствора тем же растворителем до объема 100.0 мл, перемешивают и фильтруют, 5.0 мл полученного раствора доводят растворителем до объема 10.0 мл.

Раствор сравнения (а). 25.0 мг СО ГФ РК амоксициллина тригидрата растворяют в растворителе и тем же растворителем доводят до объема 25.0 мл.

Раствор сравнения (b). 5.0 мг СО ГФ РК цефазолина натрия растворяют в растворителе и доводят объем раствора тем же растворителем до 50.0 мл. 5.0 мл полученного раствора и 5.0 мл раствора сравнения (а) доводят растворителем до объема 100.0 мл.

Хроматографирование проводят на жидкостном хроматографе с УФ-детектором в следующих условиях:

-колонка из нержавеющей стали размером 0.25 м х 4.6 мм, заполненная силикагелем -октадецилсилильным для хроматографии Р, с размером частиц 5 мкм;

-подвижная фаза А: ацетонитрил Р-растворитель (1:99);

-подвижная фаза В: ацетонитрил Р—растворитель (20:80);

-скорость подвижной фазы – 1.5 мл/мин;

-детектирование при длине волны 254 нм.

Уравновешивают колонку при соотношении подвижных фаз А:В (92:8).

Хроматографируют по 20 мкл испытуемого раствора и растворов сравнения (а) и (b) при соотношении подвижных фаз А:В (92:8), сразу же после выхода пика амоксициллина в течение 25 мин соотношение подвижных фаз А:В доводят до 0:100, затем продолжают хроматографирование  подвижной фазой В в течение 15 мин.

Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:

-эффективность хроматографической колонки, рассчитанная для пика амоксициллина на хроматограмме раствора сравнения (а), составляет не менее 2000 теоретических тарелок;

-коэффициент симметрии, рассчитанный для  пика амоксициллина на хроматограмме раствора сравнения (а), составляет не более 1.6;

-относительное стандартное отклонение, рассчитанное для площади пика амоксициллина

на хроматограмме раствора сравнения (а), составляет не более 2.0%;

-порядок выхода пиков: амоксициллин, цефазолин;

-разрешение между пиками амоксициллина и цефазолина на хроматограмме раствора сравнения (b) составляет не менее 10.0.

Время удерживания пика амоксициллина составляет около 6 мин.

Содержание амоксициллина (C₁₆H₁₉N₃O₅S) рассчитывают с учетом его количества в СО ГФ РК амоксициллина тригидрата.

ХРАНЕНИЕ^USP

В плотно укупоренном контейнере при контролируемой комнатной температуре.

МАРКИРОВКА

На этикетке жевательных таблеток должно быть указано, что таблетки жевательные и перед проглатыванием их необходимо разжевывать.

На этикетке таблеток, предназначенных только для ветеринарного применения, должно быть соответствующее указание.

 

АМПИЦИЛЛИН, КАПСУЛЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Содержание ампициллина (C₁₆H₁₉N₃O₄S) в виде ампициллина или ампициллина тригидрата в препарате должно быть не менее 92.5 % и не более 107.5% от указанного на этикетке^ВР.

Капсулы должны соответствовать требованиям общей монографии «Капсулы (0016)» и следующим требованиям.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

На хроматограмме испытуемого раствора, полученной при количественном определении, время удерживания основного пика должно соответствовать времени удерживания пика ампициллина на хроматограмме раствора сравнения (а).

ИСПЫТАНИЯ

Растворение (2.9.3). Испытание проводят в следующих условиях^USP:

прибор 1;

– среда растворения: вода Р;

– объем среды растворения – 900 мл;

– скорость вращения мешалки – 100 об /мин;

– время растворения – 45 мин.

Количество ампициллина, перешедшее в среду растворения, должно быть не менее 75% (Q) от указанного на этикетке.

Вода (2.5.12). Не более 4.0% при использовании в качестве активной субстанции ампициллина или не более 10.0 % – ампициллина тригидрата^USP.

Родственные примеси. Определение проводят методом жидкостной хроматографии (2.2.29) в следующих условиях^ВР.

Испытуемый раствор. Навеску содержимого капсул, эквивалентную 0.3 г ампициллина, встряхивают с 80 мл подвижной фазы А, перемешивают на ультразвуковой бане в течение 15 мин, доводят подвижной фазой А до объема 100.0 мл и фильтруют через фильтр с диаметром пор 0.4 мкм.

Раствор сравнения (а). 1.0 мл испытуемого раствора доводят подвижной фазой А до объема 100.0 мл.

Раствор сравнения (b). Раствор 0.25 мг/мл СО ГФ РК ампициллина безводного и 0.02 мг/мл СО ГФ РК цефрадина в подвижной фазе А.

Хроматографирование проводят на жидкостном хроматографе с УФ-детектором в следующих условиях:

– колонка размером 0.25 м•4.6 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным для хроматографии Р с размером частиц 5 мкм (например, Nucleosil C18);

– подвижная фаза А: смесь 0.5 мл уксусной кислоты разбавленной Р, 50 мл 0.2 М раствора калия дигидрофосфата и 50 мл ацетонитрила Р  доводят водой Р до объема 1000 мл;

– подвижная фаза В: смесь 0.5 мл уксусной кислоты разбавленной Р, 50 мл 0.2 М раствора калия дигидрофосфата и 400 мл ацетонитрила Р доводят водой Р до объема 1000 мл;

– программа градиентного элюирования:

Время (мин)	Подвижная фаза А (%, об/об)	Подвижная фаза В (%, об/об)
0 – tR	85	15
tR – (tR+30)	85→0	15→100
(tR+30)–(tR+45)	0	100
(tR+45)–(tR+ 60)	85	15
tR  – время удерживания пика ампициллина

– скорость подвижной фазы – 1 мл/мин;

детектирование при длине волны – 254 нм.

 

Колонку уравновешивают при соотношении подвижных фаз А:В (85:15), и такой состав используют при хроматографировании раствора сравнения (b).

Хроматографируют по 50 мкл испытуемого раствора и раствора сравнения (а) в изократическом режиме при соотношении подвижных фаз А:В (85:15). Тотчас после элюирования пика ампициллина начинают режим линейного градиента.

В качестве контрольного раствора хроматографируют подвижную фазу А в соответствии с программой градиентного элюирования.

Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме раствора сравнения (b): разрешение между пиками ампицилина и цефрадина составляет не менее 3.0; при необходимости корректируют соотношение подвижных фаз.

На хроматограмме испытуемого раствора: площадь любого пика, кроме основного, не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (а) (1%).

Микробиологическая чистота (5.1.4). В соответствии с требованиями.

Однородность дозированных единиц (2.9.40). В соответствии с требованиями.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом жидкостной хроматографии (2.2.29) в условиях, описанных для испытания Родственные примеси со следующими изменениями^ВР.

Испытуемый раствор. Точную навеску смешанного содержимого 20 капсул, эквивалентную 60 мг ампициллина, встряхивают с 80 мл подвижной фазы А в течение 15 мин, доводят подвижной фазой А до объема 100.0 мл и фильтруют. 5.0 мл полученного фильтрата доводят подвижной фазой А до объема 50.0 мл.

Раствор сравнения (а).  Раствор 0.06 мг/мл СО ГФ РК ампициллина безводного в подвижной фазе А.

Раствор сравнения (b). Раствор 0.25 мг/мл СО ГФ РК ампициллина безводного и 0.02 мг/мл СО ГФ РК цефрадина в подвижной фазе А.

Подвижная фаза: подвижная фаза А – подвижная фаза В (85:15).

Хроматографируют по 50 мкл  испытуемого раствора, растворов сравнения (а) и (b).

Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме раствора сравнения (b): разрешение между пиками ампициллина и цефрадина составляет не менее 3.0; при необходимости корректируют соотношение подвижных фаз.

Содержание C₁₆H₁₉N₃O₄S рассчитывают с учетом содержания C₁₆H₁₉N₃O₄S в СО ГФ РК ампициллина безводного.

МАРКИРОВКА

На этикетке указывают количество ампициллина тригидрата  в пересчете на ампициллин, если активной субстанцией является ампицилина тригидрат.^ВР

 

АМПИЦИЛЛИН, ПОРОШОК ДЛЯ ИНЪЕКЦИЙ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Ампициллин, порошок для инъекций, представляет собой стерильный порошок ампициллина натрия с добавлением или без добавления вспомогательных веществ в укупоренном контейнере.

Содержание ампициллина (C₁₆H₁₉N₃O₄S) в виде ампициллина натрия должно быть не менее 95.0 % и не более 105.0% от указанного на этикетке^BP.

Порошок для инъекций должен соответствовать требованиям общей монографии  «Лекарственные препараты парентеральные» (0520) и следующим требованиям.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

A. На хроматограмме испытуемого раствора, полученной при количественном определении, время удерживания основного пика должно соответствовать времени удерживания пика ампициллина на хроматограмме раствора сравнения (а).

В. Препарат дает реакцию (а) на натрий (2.3.1).

ИСПЫТАНИЯ

Время растворения. В соответствии с требованиями спецификации производителя.

Прозрачность раствора (2.2.1). Интенсивность опалесценции растворов А и В тотчас после их приготовления не должна превышать интенсивность опалесценции суспензии сравнения II.

Раствор А. 1.0 г препарата растворяют в 10 мл 1 М хлороводородной кислоты.

Раствор В.  1.0 г препарата растворяют в 10 мл воды Р.

Цветность раствора. Оптическая плотность (2.2.25) раствора В, приготовленного для испытания «Прозрачность раствора», при длине волны 430 нм не должна превышать 0.15.

рН (2.2.3). От 8.0 до 10.0.

2 г препарата растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, Р и доводят объем раствора тем же растворителем до 20 мл. Измеряют рН раствора через 10 мин после приготовления.

Механические включения (2.9.19, 2.9.20). В соответствии с требованиями.

Родственные примеси. Определение проводят методом жидкостной хроматографии (2.2.29) в следующих условиях^ВР.

Испытуемый раствор (a). Навеску смешанного содержимого контейнеров, эквивалентную 0.3 г ампициллина, встряхивают с 80 мл подвижной фазы А, перемешивают на ультразвуковой бане в течение 15 мин, доводят подвижной фазой А до объема 100.0 мл и фильтруют через фильтр с диаметром пор 0.4 мкм.

Раствор сравнения (а). 1.0 мл испытуемого раствора (а) доводят подвижной фазой А  до объема 100.0 мл.

Раствор сравнения (b).  К 0.2 г СО ГФ РК ампициллина безводного прибавляют 1 мл воды Р и нагревают при температуре 60º С в течение 1 ч. 0.5 мл полученного раствора доводят подвижной фазой А до объема 50 мл.

Раствор сравнения (с). Раствор 0.25 мг/мл СО ГФ РК ампициллина безводного и 0.02 мг/мл СО ГФ РК цефрадина  в подвижной фазе А.

Хроматографирование проводят на жидкостном хроматографе с УФ-детектором в следующих условиях:

– колонка размером 0.25 м•4.6 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным для хроматографии Р с – – размером частиц 5 мкм (например, Nucleosil C18);

– подвижная фаза А: смесь 0.5 мл уксусной кислоты разбавленной Р, 50 мл 0.2 М раствора калия дигидрофосфата и 50 мл ацетонитрила Р доводят водой Р до объема 1000 мл;

– подвижная фаза В: смесь 0.5 мл уксусной кислоты разбавленной Р, 50 мл 0.2 М раствора калия дигидрофосфата и 400 мл ацетонитрила Р  доводят водой Р до объема 1000 мл.

– программа градиентного элюирования:

Время (мин)	Подвижная фаза А (%, об/об)	Подвижная фаза В (%, об/об)
0 – tR	85	15
tR – (tR + 30)	85→0	15→100
(tR + 30) – (tR + 45)	0	100
(tR + 45) – (tR + 60)	85	15
tR  — время удерживания пика ампициллина

– скорость подвижной фазы – 1 мл/мин;

– детектирование при длине волны 254 нм.

 

Колонку уравновешивают при соотношении подвижных фаз А:В (85:15), и такой состав используют при хроматографировании раствора сравнения (c).

Хроматографируют по 50 мкл испытуемого раствора, растворов сравнения (а) и (b) в изократическом режиме при соотношении подвижных фаз А:В (85:15). Тотчас после элюирования пика ампициллина начинают режим линейного градиента.

В качестве контрольного раствора хроматографируют подвижную фазу А в соответствии с программой градиентного элюирования.

Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:

– относительное время удерживания пика димера ампициллина к пику ампициллина на хроматограмме раствора сравнения (b) составляет около 2.8;

– разрешение между пиками ампициллина  и цефрадина на хроматограмме раствора сравнения (с) составляет не менее 3.0; при необходимости, корректируют соотношение подвижных фаз.

На хроматограмме испытуемого раствора:

– площадь пика димера ампициллина не должна превышать 4.5 площади основного пика на хроматограмме  раствора сравнения (а) (4.5%);

– площадь пика любой другой примеси не должна превышать 2 площади основного пика на хроматограмме испытуемого раствора (а) (2%).

Вода (2.5.12). Не более 2.0%.

Определение проводят из 0.300 г препарата.

Стерильность (2.6.1). В соответствии с требованиями.

Бактериальные эндотоксины^ВР (2.6.14). Не более 1.5 МЕ/мл.

Содержимое укупоренного контейнера растворяют в воде для испытания на бактериальные эндотоксины (вода BET) (2.6.14) до получения раствора с концентрацией ампициллина 9.5 мг/мл.

Однородность дозированных единиц (2.9.40). В соответствии с требованиями.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом жидкостной хроматографии (2.2.29) в условиях испытания Родственные примеси со следующими изменениями^ВР.

Испытуемый раствор.  Точную навеску содержимого 10 контейнеров растворяют в подвижной фазе А до получения раствора с концентраций ампициллина 0.06 мг/мл.

Раствор сравнения (а). Раствор 0.06 мг/мл СО ГФ РК ампициллина безводного в подвижной фазе А.

Раствор сравнения (b). Раствор 0.25 мг/мл СО ГФ РК ампициллина безводного  и 0.02 мг/мл  СО ГФ РК цефрадина  в подвижной фазе  А.

Подвижная фаза: подвижная фаза А – подвижная фаза В (85:15).

Хроматографируют по 50 мкл  испытуемого раствора, растворов сравнения (а) и (b).

Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме раствора сравнения (b): разрешение между пиками ампициллина и цефрадина составляет не менее 3.0; при необходимости, корректируют соотношение подвижных фаз.

Содержание C₁₆H₁₉N₃O₄S рассчитывают с учетом содержания C₁₆H₁₉N₃O₄S в СО ГФ РК ампициллина безводного.

МАРКИРОВКА

На этикетке указывают количество ампициллина натрия в пересчете на ампициллин.

 

АТЕНОЛОЛ, ТАБЛЕТКИ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Содержание атенолола (C₁₄H₂₂N₂O₃) в препарате должно быть не менее 92.5% и не более 107.5% от указанного на этикетке.

Таблетки должны соответствовать требованиям общей монографии «Таблетки» (0478) и следующим требованиям.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

А. Навеску порошка растертых таблеток, эквивалентную 0.1 г атенолола, нагревают с 15 мл метанола Р при температуре 50⁰ С, перемешивают в течение 5 мин, фильтруют через бумажный фильтр (например, Whatman №42), фильтрат выпаривают на водяной бане досуха. Остаток нагревают с 10 мл 0.1 М хлороводородной кислоты, перемешивают и фильтруют. К фильтрату прибавляют достаточное количество 1 М натрия гидроксида для подщелачивания, экстрагируют 10 мл хлороформа Р, встряхивают с натрия сульфатом безводным Р, фильтруют, фильтрат упаривают досуха на водяной бане. Остаток сушат в сушильном шкафу при температуре 105⁰ С в течение 1 ч.

Инфракрасный спектр поглощения (2.2.24) остатка должен соответствовать спектру СО

ГФ РК атенолола.

В. Ультрафиолетовый спектр поглощения испытуемого раствора, полученного при  количественном определении, в области от 230 нм до 350 нм должен иметь максимумы при длинах волн 275 нм и 282 нм.

ИСПЫТАНИЯ

Растворение (2.9.3). В соответствии с требованиями.

Родственные примеси. Определение проводят методом жидкостной хроматографии (2.2.29) в следующих условиях^BP.

Испытуемый раствор. К навеске порошка растертых таблеток, эквивалентной 25 мг атенолола, прибавляют 25 мл подвижной фазы, перемешивают на ультразвуковой бане в течение 20 мин и фильтруют через бумажный фильтр (например, Whatman №42).

Раствор сравнения (а). 1.0 мл испытуемого раствора доводят подвижной фазой до объема 200.0 мл.

Раствор сравнения (b). 10 мг СО ГФ РК атенолола примеси растворяют в 0.1 мл диметилсулъфоксида Р, осторожно нагревая,  прибавляют 10 мл подвижной фазы и перемешивают.

Хроматографирование проводят на жидкостном хроматографе с УФ-детектором в следующих условиях:

– колонка из нержавеющей стали размером 15 см•4.6 мм, заполненная силикагелем октадецил силильным эндкепированным для хроматографии Р с размером частиц 5 мкм (например, Spherisorb ODS 2);

– подвижная фаза: 0.8 г натрия октансульфоната Р и 0.4 г тетрабутиламмония гидросульфата Р растворяют в 1 л смеси тетрагидро-фуран Р – метанол Р – 0.34% (м/об) раствор калия дигидрофосфата Р (20:180:800) и доводят рН кислотой фосфорной Р до значения 3.0;

– скорость подвижной фазы – 1.0 мл/мин;

– детектирование при длине волны 226 нм.

Хроматографируют по 20 мкл испытуемого раствора и растворов сравнения (а) и (b).

Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия: хроматограмма раствора сравнения (b) аналогична хроматограмме, прилагаемой к СО ГФ РК атенолола примеси, где пик бис эфира выходит первым и отделяется от пика третичного амина, который обычно выходит двойным пиком. При необходимости регулируют содержание натрия октансульфоната в подвижной фазе. Увеличение содержания натрия октансульфоната увеличивает время удерживания третичного амина.

На хроматограмме испытуемого раствора:

площадь пика, соответствующего блокатору кислоты на хроматограмме раствора сравнения (b), не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (а) (0.5%);

площадь каждого пика, соответствующего третичному амину и бис эфиру на хроматограмме раствора сравнения (b), не должна превышать 0.5 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (а) (0.25%).

Микробиологическая чистота (5.1.4). В соответствии с требованиями.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом абсорбционной спектрофотометрии в ультрафиолетовой и видимой областях (ГФ РК I, т. 1, 2.2.25) в следующих условиях ^BP.

Испытуемый раствор. Точную навеску порошка 20 растертых таблеток переносят в колбу вместимостью 500 мл при помощи 300 мл метанола Р, полученную суспензию нагревают до температуры 60⁰С и встряхивают в течение 15 мин. Охлаждают до комнатной температуры, доводят объем раствора метанолом Р до 500.0 мл, фильтруют через фильтровальную бумагу из тонкого стеклянного микроволокна (например, Whatman GF/C). Подходящий объем фильтрата разводят достаточным количеством метанола Р до концентрации атенолола 0.01 %.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора в максимуме поглощения при длине волны 275 нм, используя в качестве компенсационного раствора метанол Р.

Содержание C₁₄H₂₂N₂O₃ вычисляют, используя удельный показатель поглощения (Е^1%_{1 см}) атенолола в максимуме поглощения при длине волны 275 нм, равный 53.7.

 

АЦИКЛОВИР, КРЕМ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Содержание ацикловира (C₈H₁₁N₅O₃) в препарате должно быть не менее 95.0% и не более 105.0% от указанного на этикетке.

Крем должен соответствовать требованиям общей монографии «Мягкие лекарственные препараты для наружного применения» (0132) и следующим требованиям.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

А. Определение проводят методом абсорбционной спектрофотометрии в ультрафиолетовой и видимой областях (2.2.25).

Испытуемый раствор. К навеске крема, эквивалентной 7.5 мг ацикловира, прибавляют 50 мл 0.5 М раствора серной кислоты, прибавляют 50 мл этилацетата Р, встряхивают, дают слоям разделиться и отделяют нижнюю водную фазу. Органическую фазу промывают 20 мл 0.5 М раствора серной кислоты и промывки присоединяют к водной фазе. Объединенную водную фазу доводят 0.5 М раствором серной кислоты до объема 100 мл, перемешивают и фильтруют через фильтр Whatman GF/F, отбрасывая первые миллилитры фильтрата. 10 мл полученного фильтрата доводят водой Р до объема 50 мл.

Ультрафиолетовый спектр поглощения полученного раствора в области от 230 нм до 350 нм должен иметь максимум при длине волны 255 нм и минимум при длине волны около 274 нм.

В. На хроматограмме испытуемого раствора, полученной при количественном определении, время удерживания основного пика должно соответствовать времени удерживания пика ацикловира на хроматограмме раствора сравнения (а).

ИСПЫТАНИЯ

Родственные примеси. Определение проводят методом жидкостной хроматографии (2.2.29) в следующих условиях^BP.

Смесь растворителей: диметил-сулъфоксид Р – вода Р (1:4).

Фосфатный буферный раствор с рН 2.5. 3.48 г калия гидрофосфата Р растворяют в 1000 мл воды Р, рН полученного раствора доводят фосфорной кислотой Р до значения 2.5.

Фосфатный буферный раствор с  рН 3.1. 3.48 г калия гидрофосфата Р растворяют в 1000 мл воды Р, рН полученного раствора доводят фосфорной кислотой Р до значения 3.1.

Испытуемый раствор. К навеске крема, эквивалентной 25 мг ацикловира, прибавляют 10.0 мл диметилсулъфоксида Р, перемешивают на ультразвуковой бане и фильтруют через нейлоновый фильтр с размером пор 2 мкм. 2.0 мл полученного фильтрата доводят смесью растворителей до объема 5.0 мл.

Раствор сравнения (а). 1.0 мл испытуемого раствора доводят смесью растворителей до объема 100.0 мл. 1.0 мл полученного раствора доводят смесью растворителей до объема 5.0 мл.

Раствор сравнения (b). 5 мг СО ГФ РК ацикловира для проверки пригодности системы (содержит примеси А, В, J, К, N, О и Р) растворяют в 1 мл диметилсулъфоксида Р и доводят водой Р до объема 5.0 мл.

Раствор сравнения (с). Содержимое флакона с СО ГФ РК ацикловира для идентификации пиков 1 (содержит примеси С и I) растворяют в 200 мкл диметилсулъфоксида Р и доводят водой Р до объема 1.0 мл. Раствор готовят непосредственно перед использованием.

Раствор сравнения (d). Содержимое флакона с СО ГФ РК ацикловира для идентификации пиков 2 (содержит примеси F и G) растворяют в 1.0 мл раствора сравнения (b).

Хроматографирование проводят на жидкостном хроматографе с УФ-детектором в следующих условиях:

• колонка из нержавеющей стали размером 25 м х 4.6 мм, заполненная силикагелем октадецил-силильным для хроматографии Р с размером частиц 5 мкм (например, Supelcosil LC-18-DB);

– температура колонки комнатная;

– подвижная фаза А: ацетонитрил Р1 – фосфатный буферный раствор с рН 3.1 (1:99);

– подвижная фаза В: ацетонитрил Р1 – фосфатный буферный раствор с рН 2.5 (50:50);

– программа градиентного элюирования:

Время (мин)	Подвижная фаза (А) (% об/об)	Подвижная фаза (В) (% об/об)
0-5	100	0
5-27	100→80	0→20
27-40	80	20
40-46	80→100	20→0

– скорость подвижной фазы – 1.0 мл/мин;

– детектирование при длине волны 254 нм.

 

Хроматографируют по 10 мкл испытуемого раствора и растворов сравнения (а), (b), (с) и (d).

Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:

– разрешение между пиками примеси С и ацикловира на хроматограмме раствора сравнения (с) составляет не менее 1.5;

– разрешение между пиками примесей F и А на хроматограмме раствора сравнения (d) составляет не менее 1.5;

– разрешение между пиками примесей К и G на хроматограмме раствора сравнения (d) составляет не менее 1.5.

При расчете содержания примеси I, площадь ее пика умножают на поправочный коэффициент 1.5.

На хроматограмме испытуемого раствора:

– площадь пика примеси В не должна превышать 5 площадей основного пика на хроматограмме раствора сравнения (а) (1.0%);

– площадь пика примеси А не должна превышать 1.5 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (а) (0.3%);

– площадь пика примеси О не должна превышать 1.5 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (а) (0.3%);

– площадь пика любой единичной примеси не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (а) (0.2%);

– сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать 10 площадей основного пика на хроматограмме раствора сравнения (а) (2.0%).

– не учитывают пики, площадь которых составляет 0.5 и менее площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (а) (0.1%).

Микробиологическая чистота (5.1.4). В соответствии с требованиями.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом жидкостной хроматографии (2.2.29) в условиях испытания Родственные примеси.

Испытуемый раствор. К точной навеске крема, эквивалентной 25 мг ацикловира, прибавляют 10.0 мл диметил-сулъфоксида Р, встряхивают до растворения и фильтруют через нейлоновый фильтр с размером пор 2 мкм. 2.0 мл полученного фильтрата доводят смесью растворителей до объема 5.0 мл. 1.0 мл полученного раствора доводят смесью растворителей до объема 10.0 мл.

Раствор сравнения (а). 25.0 мг СО ГФ РК ацикловира растворяют в 10.0 мл диметилсулъфоксида Р. 2.0 мл полученного раствора доводят смесью растворителей до объема 5.0 мл. 1.0 мл полученного раствора доводят смесью растворителей до объема 10.0 мл.

Раствор сравнения (b). Содержимое флакона с СО ГФ РК ацикловира для идентификации пиков 1 (содержит примеси С и I) растворяют в 200 мкл диметилсулфок­сида Р и доводят объем раствора водой Р до объема 1.0 мл. Раствор готовят непосредственно перед использованием.

Хроматографируют по 10 мкл испытуемого раствора и растворов сравнения (а) и (b).

Хроматографическая система считается пригодной, если выполняется следующее условие: разрешение между пиками примеси С и ацикловира на хроматограмме раствора сравнения (b) составляет не менее 1.5 .

Содержание C₈H₁₁N₅O₃ рассчитывают с учетом содержания C₈H₁₁N₅O₃ в СО ГФ РК ацикловира.